Qual é o método de detecção da atividade da protease alcalina?
Qual é o método de Protease alcalina detecção de atividade?
A atividade enzimática refere-se à capacidade de uma enzima de catalisar certas reações químicas. A magnitude da atividade enzimática pode ser expressa pela velocidade de uma determinada reação química que ela catalisa sob condições correspondentes. Medindo a atividade de LiaoningProtease alcalinaA enzima mede, na verdade, a velocidade da reação química catalisada pela enzima. A velocidade da reação enzimática pode ser expressa pela diminuição da quantidade do substrato da reação ou pelo aumento do produto por unidade de tempo. Para fins de sensibilidade, geralmente se mede a quantidade de produto produzido por unidade de tempo. Como a velocidade da reação enzimática pode diminuir gradualmente seu valor de aumento ao longo do tempo, para medir corretamente a atividade enzimática, é necessário determinar a velocidade inicial da reação enzimática.
Princípio deProtease alcalinaPrincípio de Determinação da Atividade do Método Folin
Protease alcalinaPode catalisar a hidrólise da caseína em tirosina em condições alcalinas. A tirosina é um aminoácido que contém um grupo hidroxila fenólico e pode reagir com a folina (uma mistura de ácido fosfotúngstico e ácido fosfomolíbdico). (Reação da folina com o fenol: o reagente da folina é extremamente instável em condições alcalinas e pode ser facilmente reduzido quantitativamente por compostos fenólicos, produzindo uma mistura de azul de tungstênio e azul de molibdênio, apresentando diferentes tons de azul.) Usando colorimetria, ou seja, a quantidade de tirosina produzida pode ser determinada, e a quantidade de tirosina produzida pela hidrólise da caseína por Liaoning.Protease alcalinaem uma unidade de tempo é usado para expressar a atividade enzimática, calculando assim a atividade enzimática.
Procedimento experimental para determinação deProtease alcalinaatividade
Preparação da solução enzimática: pesar com precisão 1 g (± 0,001) de pó enzimático seco, adicionar 10 mL de solução tampão (2.2.5), dissolver em um pequeno béquer e agitar com uma vareta de vidro. Após repousar por um tempo, despejar cuidadosamente a solução da camada superior em um balão volumétrico. No meio, adicionar uma pequena quantidade de solução tampão à parte sedimentar, agitar e dissolver 4 vezes dessa maneira e, finalmente, transferir tudo para um balão volumétrico de 100 mL. Completar até a marca com solução tampão, agitar bem e filtrar com quatro camadas de gaze. Aspirar 5 mL do filtrado, transferir para um balão volumétrico de 100 mL, diluir até a marca com água destilada e diluir o líquido enzimático com um nível de 2000 vezes.
Definição deProtease alcalinaatividade
Definição deProtease alcalinaunidade de atividade: 1 grama deProtease alcalinao pó pode produzir 1 micrograma de tirosina por minuto sob condições de pH 10 e 40°C, o que é considerado uma unidade de atividade enzimática.
Precauções para determinação deProtease alcalinaatividade
1. A temperatura, o pH e o tempo da reação enzimática têm impacto direto no número de ligações peptídicas hidrolisadas, por isso devem ser rigorosamente controlados.
2. Após o término da reação com ácido tricloroacético, o filtrado obtido pela filtragem da mistura de reação deve ser límpido.
3. Como o reagente de Folin é sensível a ambientes ácidos e sujeito a alterações, há uma condição na ordem de medição. É necessário adicionar solução de carbonato de sódio para formar um ambiente alcalino e, em seguida, adicionar o reagente de Folin para que funcione normalmente.
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